Cuantificación por espectrometría de masas

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Este tutorial se aplica a la cuantificación de moléculas pequeñas utilizando espectrometría de masas en el análisis farmacocinético. Además, estos mismos principios se pueden aplicar a la cuantificación de péptidos y proteínas en matrices biológicas.

Tradicionalmente, antes del advenimiento de la espectrometría de masas moderna, la cuantificación se realizaba utilizando HPLC y detección UV. El análisis PK de HPLC se basó en: tiempo de retención, área de pico y carácter espectral UV. Desafortunadamente, el ensayo de HPLC adoleció de falta de sensibilidad y especificidad. Hemos visto ejemplos en los que una molécula se metabolizaba ampliamente y, sin embargo, el tiempo de retención y el carácter espectral UV seguían siendo los mismos que el compuesto original. Esta falta de especificidad de vez en cuando engañará al investigador. La caracterización de la EM es ahora una nueva herramienta vital en el análisis farmacocinético.

La forma aceptada de realizar la cuantificación de espectros de masa es mediante el uso de un espectrómetro de masas capaz de fragmentación MS/MS. El MS / MS utilizado junto con la cuantificación se logra comúnmente con un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo o trampa de iones. La razón por la que se requiere MS/MS es porque muchos compuestos tienen la misma masa intacta. Mientras que muchos investigadores utilizan la primera dimensión de la EM para realizar la cuantificación, esa técnica nuevamente sufre de falta de especificidad, especialmente en matrices muy complejas como la sangre. La segunda dimensión de la fragmentación de los EM en la mayoría de los casos proporciona un fragmento único. La combinación de la masa madre específica y el fragmento único de ion se utiliza para controlar selectivamente el compuesto que se va a cuantificar. A continuación, analizaremos el método para adquirir y visualizar datos LC/MS.

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