Mycoplasma

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«colonia» de micoplasma en una placa de agar de fórmula especial a 100 aumentos.

El micoplama no crece como colonias en cultivos celulares y no puede ser detectado por microscopía de luz.

 Una foto de una colonia de micoplasma utilizada para ilustrar la contaminación en cultivos celulares.

Descripción: Los micoplasmas (PPLO) son bacterias pequeñas (0,2 – 0,3 micras) sin paredes que pueden crecer a concentraciones muy altas en cultivos celulares de mamíferos, típicamente 107-108 organismos/ml, mientras permanecen inobservables por microscopía de luz regular. Aunque la contaminación por micoplasma en etapas tardías puede hacer que el medio de cultivo celular se vuelva ácido, por lo general no hay signos manifiestos de que los cultivos estén contaminados, aparte de los descritos a continuación.

Características en cultivos celulares de mamíferos: En las primeras etapas de contaminación, los micoplasmas no suelen causar cambios de pH en el medio ni tienen efectos tóxicos significativos en las células de mamíferos. Los micoplasmas crecen asociados principalmente con las membranas celulares de los mamíferos. En muchos casos no hay signos de contaminación por micoplasma, sin embargo, el micoplasma puede causar cambios en las características de crecimiento celular, inhibición del metabolismo celular, interrupción de la síntesis de ácidos nucleicos, abberaciones cromosómicas, cambios en la antigenicidad de la membrana celular, y puede alterar las tasas de transfección y la susceptibilidad al virus. La única manera de confirmar la contaminación por micoplasma es mediante pruebas de rutina con técnicas especiales. La naturaleza de las pruebas disponibles lleva al TCF a recomendar el uso de dos tipos de pruebas para un resultado de confirmación, mientras que el uso de un solo tipo de prueba debe considerarse un resultado presuntivo.

Vías típicas de infección en cultivos: En la mayoría de los casos, la contaminación por micoplasma se produce a través de la contaminación cruzada de células infectadas no probadas a otras líneas celulares. La ruta es típicamente a través de aerosolización microscópica en el aire durante el pipeteo o alguna otra transferencia de medio y/o células durante el manejo de rutina cuando más de una línea celular está debajo del capó a la vez o cuando la misma botella de medio se usa para más de una línea celular. La mejor prevención es una buena técnica aséptica en combinación con pruebas de rutina. Siempre trate de trabajar de «limpio a sucio» en orden de manejo de cultivos durante un día o una semana de trabajo. Es decir, manipular primero las células no contaminadas confirmadas, a continuación las células desconocidas o no probadas y, por último, las células que se sospecha o se sabe que están contaminadas, pero que deben mantenerse en el laboratorio por razones especiales.

Antibióticos: La mayoría de los antibióticos de rutina utilizados en cultivos celulares no son eficaces contra el micoplasma. El sulfato de gentamicina, el sulfato de kanamicina y el tartrato de tilosina son algo efectivos, pero solo pueden ser inhibitorios en lugar de micoplasmácidos. Un producto de tratamiento de Bioquímicos Moleculares de Roche, la ciclina B-M y el antibiótico ciprofloxacina son dos de los tratamientos más efectivos para tratar de curar infecciones por micoplasma, pero generalmente tienen tasas de éxito por debajo del 80% al 85%. Una lista muy útil de antibióticos, los organismos contra los que son efectivos y las concentraciones de trabajo recomendadas compiladas por la compañía Sigma-Aldrich se puede encontrar en un documento pdf (129 Kb, 3 páginas) haciendo clic en el siguiente enlace. El archivo se descargará y se podrá abrir con Adobe Acrobat Reader. Lista de antibióticos

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