마이크로주입-유전공학기술

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마이크로주입

마이크로주입은 유리 마이크로피펫을 통해 외래 유전자를 살아있는 세포(세포,난자,난자,동물의 배아)에 전달하는 기술이다. 유리 마이크로 피펫의 한쪽 끝은 유리가 다소 액화 될 때까지 가열됩니다. 그것은 빨리 격렬한 끝에 아주 정밀한 끝을 형성하는 기지개됩니다. 피펫의 끝은 주입 바늘을 닮는 대략 0.5 밀리미터 직경에 달성합니다. 외국 유전자 전달 과정은 강력한 현미경으로 이루어집니다. 마이크로 주입 될 셀은 용기(그림 1)에 배치됩니다. 4.15). 지주 피펫은 현미경의 시야에 배치됩니다. 지주 피펫은 부드럽게 빨려 들어갈 때 팁에 대상 셀을 고정시킵니다. 마이크로 피펫의 팁은 세포의 막을 통해 주입됩니다. 바늘의 내용은 세포질로 전달되고 빈 바늘은 밖으로 가지고 갑니다. 도 1 에 도시된 바와 같이,난자의 미세주입 방법도 있다. 4.15. 계란에 유전자 준비를 미세 주입하는 방법.
제노푸스 난 모세포는 난 모세포가 체세포보다 6,000~100,000 개 이상의 아르 자형 중합 효소 분자를 함유하고 있기 때문에 미세 주사에 의한 전사 연구에 널리 사용되어왔다. 미세 주입은 큰 크기의 난 모세포 때문에 기술적으로 쉽습니다. 개발 중 유전자 조절의 내인성 패턴 중 일부는 특징 지워졌습니다(위켄스 및 래 스키,1981). 주입된 유전자 핵 유전자 무작위로 통합 하 고 그것의 식 외국 유전자 적합 한 발기인 시퀀스에 연결 하는 경우에 가능 수 있습니다. 다른 유형의 동물 세포가 미세 주입되어 성공적으로 옮겨진 많은 예가 있습니다.
루빈 및 스프래링(1982)은 처음으로 크산틴 탈수소 효소에 대한 초파리 유전자를 피-요소(부모 요소)에 도입했으며,이는 온전한 헬퍼 피-요소로 마이크로 주입되어 이 유전자에 대한 배아가 결핍되었다. 이러한 배아는 나중에 첫 번째 부모 세대와 같이 모자이크 눈보다 장미 빛 색의 눈을 가진 파리를 개발했습니다.
1982 년 형질 전환 동물 생산
워싱턴 대학의 팔미 터와 알 엘.이 유전자는 유전자뿐만 아니라 인간 성장 호르몬,티미 딘 키나아제 유전자 및 메탈로 티오 네인 유전자와 관련된 마우스의 프로모터 영역과 별도로 연결되어 있습니다(금속 결합 단백질을 암호화하는 유전자). 그 결과,플라스미드는 재조합된 플라스미드를 생성하였다. 성인 마우스에서 성숙한 계란 수술로 복구 하 고 체 외에서 정자와 수정 된 했다. 즉시 수정 된 난자는 정자와 난자 핵이 융합되어 이배체 접합체를 형성하기 전에 재조합 플라스미드로 미세 주입되었습니다. 플라스미드는 일반적으로 계란 내에서 서로 상동 적으로 결합하여 긴 반복 된 연결체를 형성 한 다음 무작위로 통합되어 단일 염색체 부위에서 반복되는 유전자를 제공합니다. 설계 된 배아 다음 추가 개발에 대 한 호스트 마우스 어머니의 자 궁에 이식 했다. 생성 된 마우스는 게놈의 일부가 유 전적으로 관련이없는 다른 유기체에서 유래하기 때문에’형질 전환 마우스’라고 불립니다. 핵융합 전에 외래 유전자의 도입으로 인해 염색체 통합이 일찍 일어나고 자손은 새로운 유전자를 포함합니다. 자손의 크기와 체중은 정상적인 것보다 매우 컸습니다(그림 1). 4.16).
다른 실험(팔미터외 1982)에서 마우스 메탈로티오네인 1 유전자의 프로모터 영역에 융합된 쥐 성장호르몬 유전자를 포함하는 유전자 단편을 마우스 배아에 주입하였다. 이러한 마우스 염색체에 보다 효율적으로 통합 하기 때문에이 실험에서 선형 유전자 조각 플라스미드 보다는 사용 되었다. 결과적으로 21 마리의 마우스가 생산되었으며,그 중 7 마리는 융합 유전자를 함유하고있다. 여섯은 다른 사람보다 체중이 두 배 더 컸다. 성장 호르몬의 수준은 대조군보다 여러 번(200-800 배 사이)증가했습니다. 또한,성장 호르몬의 수준은 또한 간 세포에서 증가 하였다. 마찬가지로,양,염소,돼지,토끼 등과 같은 많은 형질 전환 동물. 또한 마이크로 주입 기술을 통해 생산되었습니다.
체외수정(체외수정)기술
체외수정이라는 용어는 유리 또는 인공상태에서 의미하고,체외수정은 유리제품에서 정자에 의한 난자의 수정이 발생한다는 사실을 말한다.

형질전환 마우스의 제조;메티오닌

도. 4.16. 유전자 변형 마우스의 생산;산,메티오닌.

농장동물의 체외수정 기술
요즘에는 농장동물의 과배란을 유도하는 데 사용되는 자연 및 재조합 유전자 기술을 통해 외인성 호르몬이 개발되어 왔다. 과배란은 한 번에 한 명의 여성이 호르몬 치료를 통해 정상적인 수의 난자를 생산하는 현상입니다.
정상적인 소는 배란 기간 동안 하나 또는 두 개의 알을 생산하는 반면,과배란을 받으면 8-10 개의 알을 생산할 수 있습니다. 따라서 정상적인 번식을 통해 동물은 생애에서 약 4-5 마리의 새끼를 낳고 체외 수정 기술을 통해 생애에서 50-80 마리의 새끼를 낳을 수 있습니다. 자세한 설명은 생식 및 형질 전환 동물의 조작을 참조하십시오.
인간의 체외수정 기술
로버트 윈스턴 교수에 의해 인간의 체외수정 기술이 개척되었다. 1978 년 7 월 25 일에 세계 최초의 시험관 여성 아기 루이스 제이 브라운을 생산하기 위해 피 스텝토와 알 에드워즈가 동일한 기술을 사용했습니다. 그 이후로 지금까지 25,000 명 이상의 아기가 생산되었습니다.
초기 난자는 복강경을 사용하여 환자의 난소에서 회수되었다. 작은 절개는 배꼽의 밑에 다만 하고 복강경은 소개됩니다. 계란은 중공 바늘로 제거됩니다. 일반적으로,단 하나 계란은 자연적인 방법으로 특정 기간 후에 한번에 조달될 수 있습니다. 그러나 과배란을 통해 한 번에 더 많은 알을 얻을 수 있습니다.
호르몬은 약 28 일 동안 매일 주입됩니다. 때로는 부작용이 발생할 수 있습니다. 계란은 특수 유체에 보관하고 결함을 현미경으로 검사합니다. 계란은 신선한 정액이 들어있는 페트리 접시에 옮겨집니다. 배우자는 비옥하게하는 데 12-15 시간이 걸립니다. 수정 접합자는 체온에서 다른 유체에 보관 한 후. 세포 분열은 정기적으로 관찰됩니다. 배아는 배반포 단계에 도달 할 때,성장의 마지막 단계,그것은 자궁에 이식. 이식 된 모든 배아가 자랄 필요는 없습니다. 이식 후 그와 관련된 많은 합병증이 있습니다. 따라서,성공을 얻기 위해 일반적으로 세 개의 배아는 한 번에 자궁으로 전송됩니다. 이것은 성공에 근거를 둔 1 개,2 개 또는 3 명의 아기의 출생 귀착됩니다. 이 과정을 접합체 내전(지프트)이라고합니다. 곳에 계란 및 정액이 나팔관안에 풍부하게 함을 촉진하기 위하여 두는 다른 기술 있는다. 이것은 배우자 내전(선물)으로 알려져 있습니다.
인도에는 뭄바이,콜라타,체나이,델리 등 9 개의 센터가 자녀가없는 커플을 돕고 있습니다.
지프트와 선물 외에도 미세 주입 기술은 올리고 정자 환자에게도 적용됩니다. 여기서 하나의 정자가 수정을 촉진하기 위해 난자에 직접 주입됩니다.
관련 문제가 테스트 튜브 아기
지만 IVF 기술은 보탬이 자식이 커플,아직 거기에 여러 가지 문제에 관련된 경우,그것가 상용화되어 있습니다. 이러한 문제는 종교적,윤리적,정서적 또는 정치적 일 수 있습니다. 예를 들어,가톨릭교회는 체외수정 기법을 승인하지 않는다. 선물은 받아 들일 수 있지만 지프는 그렇지 않습니다. 말레이시아와 같은 무슬림 국가들은 정자 기증을 부도덕 한 것으로 믿는다. 기증 된 정자를 낳은 어린이는 불법으로 간주됩니다. 하지만 지금까지 한국에서는 논란이 없었다. 인도에서는 1994 년 1 월 뉴델리에 최초의 정자 은행이 설립되어 자녀가없는 부부를 도왔습니다.
정서적 문제 중 하나는 사용되지 않은 여분의 배아이다. 그들은 멀리 던져 또는 대리모에 이식 할 것인지 여부. 첫 번째는 도덕적 질문입니다. 대리모는 동물 인큐베이터 역할을하고 정상적인 임신 후 아기를 제공합니다. 그들은 기증자에게서 오는 것처럼 유전 물질을 기여하지 않습니다. 따라서 대리모가 상용화 될 수 있습니다. 아이는 그들의 진짜 아이가 될 수 없습니다. 기증 된 난자/정자를 통해 태어난 아이들은 사회적 또는 종교적 인정을받을 수 있습니까? 아이들은 그들의 생물학적 부모에 대해 알 수 있습니까? 그들의 부모는 그들을 받아 들일 것인가?

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