Mikroinjeksjon-Genetisk Teknikk

author
6 minutes, 5 seconds Read

Mikroinjeksjon

Mikroinjeksjon er en teknikk for å levere fremmed DNA i en levende celle (en celle, egg, oocyt, embryoer av dyr) gjennom en glass mikropipette. Den ene enden av en glassmikropipette oppvarmes til glasset blir noe flytende. Det er raskt strukket som danner en veldig fin spiss ved den oppvarmede enden. Pipettespissen når en diameter på omtrent 0,5 mm som ligner en injeksjonsnål. Prosessen med å levere fremmed DNA er gjort under et kraftig mikroskop. Celler som skal mikroinjiseres, plasseres i en beholder (Fig. 4.15). En holdepipette er plassert i mikroskopets synsfelt. Holdepipetten holder en målcelle på spissen når den forsiktig suges. Spissen av mikropipetten injiseres gjennom cellens membran. Innholdet i nålen leveres inn i cytoplasma og den tomme nålen tas ut.

 en metode for mikroinjeksjon AV DNA-preparat i egg

Fig. 4.15. En metode for mikroinjeksjon AV DNA-preparat i egg.

Xenopus-oocytter har blitt mye brukt til studier av transkripsjon ved mikroinjeksjon fordi oocytter inneholder mellom 6000 og 100 000 eller flere rna-polymerasemolekyler enn somatiske celler. Mikroinjeksjon er teknisk lett på grunn av stor størrelse av oocytter. Noe av det endogene mønsteret av genregulering under utvikling har blitt karakterisert (Wickens and Laskey, 1981). Det injiserte DNA integrerer tilfeldig med nukleært DNA, og dets uttrykk kan bare være mulig når det fremmede DNA er festet til en passende promoter-sekvens. Det er mange eksempler hvor ulike typer dyreceller har blitt mikroinjisert og vellykket overført.
Rubin and Spradling (1982) introduserte For første gang Drosophila-gen for xantin dehydrogenase i Et P-element (foreldreelement) som ble mikroinjisert med et intakt hjelper P-element i embryo mangelfull for dette genet. Slike embryoer utviklet senere fluer med rosenrøde øyne enn mosaikkøyne som i første foreldregenerasjon.
Produksjon Av Transgene Dyr
I 1982, R. D. Palmiter Av Washington University Og R. L.Brinter fra Pennsylvanian University isolerte kaninveksthormonet (p-globin) genet, humant veksthormon ((i-globin) genet samt tymidinkinasegenet og koblet separat til promotorregionen av mus assosiert med metallothionein I-genet (et gen som koder for et metallbindende protein). Dette ble koblet til pBR322 plasmid for å produsere rekombinante plasmider. Modne egg fra voksen mus ble gjenvunnet kirurgisk og befruktet med sperms in vitro. Umiddelbart ble de befruktede eggene mikroinjisert med rekombinante plasmider før sæd-og eggkjernene har smeltet sammen for å danne en diploid zygote. Plasmidene kombinerer generelt homologt med hverandre i egget og danner en lang gjentatt konkatemer som deretter integrerer tilfeldig for å gi gjentatte gener på et enkelt kromosomalt sted. De konstruerte embryoene ble deretter implantert i livmoren til en vertsmusemor for videre utvikling. De resulterende musene kalles ‘transgene mus’ siden en del av genomet kommer fra en annen genetisk urelatert organisme. På grunn av innføring av fremmed gen før kjernefysisk fusjon skjer kromosomal integrasjon tidlig og avkom inneholder nye gener. Størrelse og kroppsvekt av stamfedre var ekstremt større enn de normale (Fig. 4.16).

i et annet eksperiment ( Palmiter et al 1982) injiserte musembryoer med ET DNA-fragment som inneholdt rotteveksthormongenet smeltet til promotor-regionen av musens metallothionein i-gen. I dette eksperimentet ble lineære DNA-fragmenter brukt i stedet for plasmider fordi disse integrerer mer effektivt inn i musekromosomene. Følgelig ble 21 mus produsert, blant dem inneholdt syv fusjonsgenet. Seks var to ganger større i kroppsvekt enn de andre. Nivået på veksthormoner økte mange ganger (mellom 200-800 ganger) mer enn kontrollen. I tillegg ble nivået av veksthormon mRNA også økt i leverceller. Tilsvarende mange transgene dyr som sau, geit, griser, kanin, etc. har også blitt produsert gjennom mikroinjeksjonsteknikk.
IN vitro fertilisering (IVF) teknologi
begrepet in vitro betyr i glass eller i kunstig tilstand, OG IVF refererer til det faktum at befruktning av egg av sæd forekommer i glassvarer.

 Produksjon av transgene mus; MT, metionin

Fig. 4.16. Produksjon av transgene mus; MT, metionin.

IVF-teknologi hos husdyr
i Dag har eksogene hormoner blitt utviklet gjennom naturlig OG rekombinant DNA-teknologi som brukes til å indusere superovulasjon hos husdyr. Superovulasjon er et fenomen som produserer større enn det normale antall egg gjennom hormonell behandling av en enkelt kvinne om gangen.
en vanlig ku produserer ett eller to egg i løpet av en ovulatorisk periode, mens den samme kan produsere 8-10 egg når den blir utsatt for superovulasjon. Derfor, gjennom normal reproduksjon, produserer et dyr ca 4-5 avkom i hennes liv, mens GJENNOM IVF-teknologi kan det samme produsere 50-80 avkom i hennes liv. For en detaljert beskrivelse se Manipulering Av Reproduksjon Og Transgene Dyr.
IVF-teknologi hos mennesker
IVF-teknologi ble utviklet hos mennesker Av Prof. Robert Winston. Den samme teknikken ble brukt av P. Steptoe og R. Edwards til å produsere Verdens første testrør kvinnelige baby, Louise J. Brown, 25.juli 1978. Siden da har mer enn 25.000 babyer blitt produsert så langt.
tidligere egg ble gjenvunnet fra pasientens eggstokk ved hjelp av laparoskop. Et lite snitt er laget like under navlen og laparoskopet er introdusert. Eggene fjernes med en hul nål. Vanligvis kan bare et enkelt egg anskaffes om gangen etter en viss periode på naturlig måte. Men gjennom superovulasjon kan flere egg oppnås om gangen.
hormonet injiseres daglig i ca 28 dager. Noen ganger kan bivirkninger finne sted. Eggene holdes i en spesiell væske og undersøkes mikroskopisk for eventuelle feil. Egg overføres til En Petriskål som inneholder fersk sæd. Gametene tar 12-15 timer å gjødsle. Etter befruktning holdes zygote i en annen væske ved kroppstemperaturen. Celledeling observeres regelmessig. Når embryoet når til blastocyststadiet, det siste stadiet av vekst, blir det implantert i livmor. Det er ikke nødvendig at alle implanterte embryoer vil vokse. Det er mange komplikasjoner relatert til det etter implantasjon. Derfor, for å få suksess generelt tre embryoer overføres til livmoren på en gang. Dette resulterer i fødsel av en, to eller tre babyer basert på suksess. Denne prosessen kalles zygote intrafallopian transfer (ZIFT). Det er en annen teknikk der egg og sædceller er plassert i egglederen for å lette befruktning. Dette er kjent som gamete intrafallopian transfer (GAVE).
I India er det ni sentre som Mumbai, Kolata, Chenai, Delhi og andre som hjelper de barnløse parene.
i TILLEGG TIL ZIFT og GIFT brukes mikroinjeksjonsteknikken også hos oligospermiske pasienter. Her injiseres en sæd direkte i et egg for å lette befruktning.
Problemer relatert til reagensrør babyer
SELV OM IVF-teknologien er en velsignelse for barnløse par, men det er flere problemer knyttet til det, hvis det blir kommersialisert. Disse problemene kan være religiøse, etiske, emosjonelle eller politiske. For Eksempel godkjenner Den Katolske Kirken IKKE IVF-teknikken da den proklamerer at unnfangelsen aldri skal tas ut av kroppen. GAVEN er akseptabel, MENS ZIFT ikke er. Muslimske Land som Malaysia mener sæddonasjon som umoralsk. Barn som bæres av donerte spermier regnes som illegitime. Det er imidlertid ingen kontrovers i India så langt. I India ble den første sædbanken opprettet I New Delhi i januar 1994 for å hjelpe de barnløse parene.
et av de emosjonelle problemene er de ubrukte ekstra embryoene. Enten de vil bli kastet bort eller implantert i surrogatmødre. Den første er det moralske spørsmålet. Surrogatmødrene fungerer som dyr inkubator og leverer baby etter normal svangerskap. De bidrar ikke med det genetiske materialet som det kommer fra giverne. Derfor kan surrogatmødrene bli kommersialisert. Barnet vil ikke være deres virkelige. Vil barna som bæres gjennom donert egg / sæd, bli gitt sosial eller religiøs anerkjennelse? Vil barna bli kjent med sine biologiske foreldre? Vil foreldrene akseptere dem?

Similar Posts

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.